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聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠的配置過程

作者:admin 來源:未知 日期:2018/2/1 10:13:18 人氣: 標簽:
導讀:聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠的配置過程(1)製膠在兩塊製膠玻璃板中間放上墊片,放上製膠架,擰緊製膠螺絲夾緊玻璃板。製備適量合適濃度的凝膠,使之略多於膠板,不同濃度(%)聚丙酰胺凝膠的製法:在加入TEMED和10%過硫…

聚丙烯酰胺凝膠電泳凝膠的配置過程

    
    (1)製膠 在兩塊製膠玻璃板中間放上墊片,放上製膠架,擰緊製膠螺絲夾緊玻璃板。 製備適量合適濃度的凝膠,使之略多於膠板, 不同濃度(%)聚丙酰胺凝膠的製法: 在加入 TEMED 和 10%過硫酸銨後,立即混勻,倒入放置 45℃角的玻璃板內,完全注滿(注 意不要有氣泡) ,迅速將玻璃板放置水平位置。立即放成型梳子於腔頂並夾緊,待 30-60 分 鍾膠聚合後,取下膠板,放入電泳槽中固定。 
 
    (2)加樣和電泳 上下槽中加入 1×TBE 電泳緩衝液,溢過加樣孔,拔出梳子,排出加樣孔中的氣泡,將 PCR 產物或限製性內切酶消化產物 2 與 1 上樣緩衝液混勻, 用微量注射器加入加樣孔底部, 使樣 品在孔底成一層,兩側孔中加入標準分子量的 DNA Marker。 以 2-10V/cm 電壓電泳,電泳時間足夠長,使片斷足以分開,待指示劑走到適宜位置時關閉 電源,將膠片取出。
 
     (3)銀染 分開兩塊玻璃板, 將凝膠片放入 100ml 銀染固定液中振蕩 15min, 雙蒸水洗 3 次, 每次 2min, 然後將凝膠片轉入 100ml 0.2%的 AgNO3 中於搖床上染色約 10min,吸去 AgNO3 液,用雙蒸 水洗 3 次,每次 30s,加入 100ml 顯色液約 7-10min,待 DNA 帶顯示清除時,吸去顯色液, 加入固定液 Na2CO3,靜置 2-3min,取出凝膠觀察。 
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